Kolorimetrik üsul - tədqiq edilmiş və məlum maddələrin rəng doymalarının müqayisəsinə əsaslanan analiz. Fiziki və kimyəvi testlərin nəticələri bir çox elm sahələri üçün böyük dəyərə malikdir, lakin bütün tədqiqatların əksəriyyəti tibbdə istifadə olunur.
Kolorimetrik metodun mahiyyəti
Maddələrin kimyəvi tərkibini təyin edən bir çox test növləri var. Onlardan bəziləri universaldır və müxtəlif sahələrdə geniş istifadə olunur, digərləri daha yüksək dəqiqliklə spesifikdir. Kolorimetrik üsul universaldır.
Təhlilin mahiyyəti ondan ibarətdir ki, konsentrasiyası naməlum məhlulun rəng doyması standart məhlulun rəngi ilə müqayisə edilir. Təhlil zamanı tədqiq olunan komponentin müəyyən reagentlə qarşılıqlı təsiri nəticəsində rəngli birləşmə əmələ gəlir. Reaksiya başa çatdıqdan sonra yaranan kölgə konsentrasiyası artıq məlum olan məhlulların rəngi ilə müqayisə edilir.
Kolorimetriyanın banisinin Robert Boyl olduğu güman edilir. Sıxmaqdan istifadə etdiməhlulda dəmiri misdən ayırmaq üçün taninlər. Məhz Boyl qeyd etdi ki, məhlulda dəmir konsentrasiyası nə qədər çox olarsa, sonuncunun tonu bir o qədər zəngin olur.
Kolorimetriya
Kolorimetriya məhlullardakı maddənin miqdarını təyin etmək üçün bir üsuldur. Təhlil Bouguer-Lambert-Beer qanununa əsaslanır: işıq şüası maddənin sıx uducu təbəqəsinə dəydikdə onun intensivliyi zəifləyir.
Maddənin konsentrasiyasını təyin etmək üçün kolorimetrik üsul rəng intensivliyini ölçmək üçün xüsusi alətlərdən istifadə etməklə vizual müqayisə və ya müqayisədən istifadə edə bilər. Müqayisə birbaşa və kompensasiyaedici şəkildə aparılır.
- Düz. Metod mayenin müəyyən bir sıxlığı və temperaturunda sınaq məhlulunun rəng səviyyəsini istinad məhlulu ilə müqayisə etməyi nəzərdə tutur. Fotokolorimetrlərdən və spektrofotometrlərdən istifadə edərkən istinad məhlulu kimi distillə edilmiş su istifadə olunur. Cihazlar işığın intensivliyindən asılı olan cərəyanın intensivliyini ölçür.
- Kompensasiya. Metod öyrənilən nümunənin rəngini istinad birinə gətirməyə əsaslanır. Nəticə həlledici əlavə etməklə və ya ləkələnmiş mühitin təbəqəsinin hündürlüyünü artırmaqla əldə edilir.
Spetrofotometrin, monoxromatorun və digər dəqiq alətlərin istifadəsi onsuz da sadə olan tədqiqat metodunu daha da sadələşdirir və nəticələrin dəqiqliyini artırmağa imkan verir. Bu cihazlar işığın ötürülməsinin miqdarını ölçməyə və dalğa uzunluğunu müəyyən etməyə qadirdir.
Təhlilin tətbiq olunduğu yer
Dəqiq kimyəvi tərkibi məlum olduqda, müqayisə üçün istinad nümunəsi olduqda, sınaq və istinad nümunəsinin temperaturu eyni olduqda kolorimetrik analiz üsulundan istifadə edilir. Əgər rəngli maddənin miqdarını tez müəyyən etmək lazımdırsa, lakin o qədər kiçikdirsə, analitik metodu tətbiq etmək mümkün deyil.
Kolorimetriya tibbdə klinik biokimyəvi tədqiqatlar və digər sahələr üçün geniş istifadə olunur:
- əczaçılıq sənayesi;
- qida və spirt sənayesi;
- aqronomiya (torpağın keyfiyyətinin təyini).
Müsbət və mənfi cəhətlər
Kolorimetrik metodun, hər hansı digər kimi, müsbət və mənfi cəhətləri var.
Üstünlüklərə aşağıdakılar daxildir:
- analiz asanlığı, minimum hazırlıq prosedurları;
- az miqdarda test materialı ilə belə sınaq imkanı;
- bahalı avadanlıqlara ehtiyac yoxdur, baxmayaraq ki, son vaxtlar ucuz olmayan müasir cihazlar daha çox istifadə olunur. Lakin onlar ən dəqiq nəticəni təmin edirlər.
Dezavantajlar: analitik metodlarla müqayisədə analizin aşağı dəqiqliyi.
Zülal təyini üçün biuret üsulu
Qan zərdabında olan zülal homeostazın vəziyyətini əks etdirən göstəricidir. Qanda makromolekulyar birləşmənin konsentrasiyasının artması hiperproteinemiya, aşağı məzmunu isə hipoproteinemiya adlanır.
Proteinlərqan serumu fərqli tərkibə, quruluşa, xüsusiyyətlərə malikdir, müxtəlif funksiyaları yerinə yetirir. Onlar fermentlərə, hormonlara, immunoqlobulinlərə və başqalarına bölünür. Zülalların bütün qrupları bir sıra ümumi xüsusiyyətlərə malikdir və onların əsasında bioloji mayelərdə makromolekulyar üzvi birləşmələrin təyini üçün üsullar işlənib hazırlanmışdır.
Klinik biokimyanın bütün üsullarından zülalın təyini üçün kolorimetrik üsullardan ən çox istifadə olunur. Onlar nisbətən ucuzdur, bu da büdcə təşkilatları üçün vacibdir. və olduqca sadədir. Ən çox yayılmış biuret üsuludur. Metodun mahiyyəti: qələvi mühitdə olan zülallar mis sulfatla reaksiya verir və bənövşəyi birləşmələr əmələ gətirir. Qanda zülalın tərkibi boyanmanın doyması ilə müəyyən edilir. Analiz üçün biomaterial səhər acqarına götürülür.
Təhlil çox dəqiqdir, lakin qanda protein konsentrasiyasına təsir edən amillər var:
- biyomaterial nümunəsindən qısa müddət əvvəl fiziki fəaliyyət;
- hamiləliyin və laktasiyanın son həftələri;
- kortikotropin, Miscleron, Clofibrate preparatlarının istifadəsi qanda protein tərkibini artırır, Pirazinamid və estrogenlərin istifadəsi isə konsentrasiyanı az altmaq üçün;
- biomaterial nümunəsi zamanı əlin yanlış mövqeyi.
Dəmirin təyini
Qanda dəmirin miqdarı müxtəlif xəstəliklərin diaqnostikasında əsas göstəricilərdən biridir. Maddə oksigenin toxumalara daşınmasını təmin edən hemoglobində cəmləşmişdir. üçündəmirin kolorimetrik üsulla təyini, əksər hallarda əsas reagent kimi batofenantrolin məhlulu (0,02%) istifadə olunur. Biomaterial - hemoliz izləri olmayan serum.
Metodun mahiyyəti: dəmir ionları ilə sulfatlaşdırılmış batofenantrolinin qarşılıqlı təsiri rəngli kompleks əmələ gətirir, onun doyması fotometrik üsulla müəyyən edilir. Aydın bir həll əldə etmək üçün biomaterialdan nümunə götürmə qaydalarına riayət etmək lazımdır, lakin dəmir-liqand komplekslərinin optik sıxlıqlarını dəqiq müəyyən etmək üçün hidroksilamin və yuyucu vasitələrdən (natrium dodesil sulfat) istifadə edərək dəmir hemoglobindən ayrılır. Testin nəticəsi patologiyanın mövcudluğunu və dərəcəsini müəyyən edir. Normal dəmir konsentrasiyası belə olmalıdır:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (kişilər);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (qadınlar).
Dəmir çatışmazlığı adətən qan itkisi, qeyri-adekvat qida qəbulu və ya mədə-bağırsaq traktından zəif sorulma ilə əlaqələndirilir.
Xolesterol testi
Xolesterol bir çox orqanizmin, o cümlədən insanların hüceyrə divarında olan üzvi maddədir. Xolekalsiferol və steroid hormonlarının istehsalı üçün lazımdır. 3,37-5,2 mmol/l xolesterinin səviyyəsi normal sayılır. Yüksək məzmun aterosklerozun əsas səbəblərindən biridir.
Xolesterolu təyin etmək üçün kolorimetrik üsullar damar xəstəliklərini erkən mərhələdə tanımağa imkan verir. İşemiyanın ölümcül nəticəsi olan patoanatomik nəticələrə görə, xəstələrdə lipofilik spirtin konsentrasiyası6,5-7,8 mmol/L idi.
Kolorimetrik metodun prinsipi ondan ibarətdir ki, xolesterol 3beta-hidroksi-steroid oksidoreduktaza ilə oksidləşərək, p-aminoatipirini rəngli birləşməyə çevirən hidrogen peroksidi buraxır. Xolesterolun tərkibi onun rənginin doyması ilə müəyyən edilir.
Uşaqda test apararkən nəzərə almaq lazımdır ki, uşaqlıqda xolesterinin konsentrasiyası 4,1 mmol/l-dən çox olmamalıdır.
Enzimatik kolorimetrik üsul nədir?
Enzimatik testlər yüksək aktivliyə malik fermentlərin reaksiyalarının istifadəsinə əsaslanır. Onlar müxtəlif maddələri - nitrat ionlarından tutmuş makromolekullara qədər - müəyyən etmək üçün analitik kimyada geniş istifadə olunur.
Enzimatik (fermentativ) üsullar spesifikdir, tərkibində oxşar olan digər maddələrin iştirakı ilə müəyyən maddələrin təhlilinə imkan verir. Fermentin istifadəsinə əsaslanan ən ümumi üsullar - qlükoza oksidazı. Test qanda qlükoza konsentrasiyasını təyin etmək üçün istifadə olunur. Testin dəqiqliyi ondan 2-ci tip diabetli xəstələrdə hipoqlikemik agentlərin dozasını tənzimləmək üçün istifadə etməyə imkan verir.
Qlükoza oksidləşdirici üsul qlükozanı təyin etmək üçün ən yaxşı kəmiyyət üsullarından biri hesab olunur. Həm qan (kapilyar), həm də zərdab biomaterial kimi istifadə oluna bilər, lakin plazma daha çox üstünlük təşkil edir, çünki onun tərkibində hematokrit daha azdır və bu, nəticənin düzgünlüyünə mənfi təsir göstərir.
Fotometriyanın kinetik üsulundan əsasən istifadə olunur. Onun mahiyyəti ondadır kiqlükoza oksidaz və peroksidazın müəyyən edilmiş nisbəti, reaksiya başladıqdan sonra müəyyən bir müddət ərzində rəngli birləşmənin əmələ gəlmə sürəti nümunədəki qlükoza səviyyəsinə uyğun olacaqdır. Testin əsas üstünlüyü ondan ibarətdir ki, nəticə nümunədə üçüncü tərəf birləşmələrinin olmasından təsirlənmir. Metodun çatışmazlıqları da var - sınaq üçün Alman və ya İsveç istehsalçılarının bahalı ölçü alətləri tələb olunur.
Nəticə
Kolorimetrik üsul dəqiq və istifadəsi asandır. Onun tibbdə istifadəsi orqanizmdə baş verən müxtəlif patoloji dəyişiklikləri erkən aşkarlamağa imkan verir. Yeni texnologiyaların tətbiqi ilə üsul təkmilləşdirilir və getdikcə populyarlaşır.
