Bu yaxınlarda insanların müxtəlif yoluxucu xəstəliklərinin diaqnostikası üçün etibarlı, yüksək həssas və sürətli üsul işlənib hazırlanmışdır. Bu üsul “PCR analizi” adlanır. Bu nədir, mahiyyəti nədir, hansı mikroorqanizmləri aşkar edə bilər və onu necə düzgün qəbul etmək olar, biz məqaləmizdə danışacağıq.
Kəşf tarixçəsi
Polimeraza zəncirvari reaksiya (PZR) metodunu 1983-cü ildə amerikalı alim Kary Mullis icad etdi. Əvvəlcə diaqnostika metodu onun yaradıcısının işlədiyi Cetus Korporasiyası tərəfindən patentləşdirildi. Lakin 1992-ci ildə bütün hüquqlar və patentlər Hoffman-La Roche-yə satıldı. Bundan sonra məlum oldu ki, oxşar tədqiqatlar paralel olaraq aparılıb və Alice Çen, Devid Edqar, Con Trell kimi digər amerikalı bioloqlar tərəfindən qeydə alınıb. 1980-ci ildə sovet alimləri A. Slyusarenko, A. Kaledin və S. Qorodetski də bu problemlə məşğul olmuşlar. Ona görə də yeganə müəllif hüququnun sahibini müəyyən etmək mümkün deyildi. Bir çox görkəmli biokimyaçılar polimeraza zəncirvari reaksiya texnikasının inkişafına müəyyən töhfə vermiş və öz yeniliklərini patentləşdirmişlər. Hazırda təhlilPCR hər yerdə xüsusi təchiz olunmuş laboratoriyalarda aparılır.
PZR diaqnostika metodunun mahiyyəti
PCR analizi: bu nədir və necə işləyir? Metodun mahiyyəti xüsusi DNT polimeraza fermentindən istifadə edərək süni şəraitdə müəyyən mikrob mühitinin həcmini artırmaqdır. Bunun üçün mövcud DNT materialı dəfələrlə çoxaldılır. Beləliklə, nümunədə patogen mikroorqanizm olduqda, biokimyəvi laboratoriya manipulyasiyaları hesabına onun miqdarı artırılacaq və mikroskop altında bakteriyanı aşkar etmək çətin olmayacaq.
Material tədqiqatı necə aparılır?
Analiz üçün tələb olunur:
- DNT matrisi;
- materialın uclarını birləşdirən astarlar;
- istiliyədavamlı DNT polimeraza fermenti;
- fermentlərin düzgün işləməsini təmin edən kimyəvi maddələr;
- DNT materialının böyüməsi və inkişafı üçün müvafiq şərait yaratmaq üçün lazım olan bufer məhlulu.
PZR həyata keçirmək üçün üç mərhələdən ibarət 25-30 təkrar həyata keçirilir: denatürasiya, yumşalma və uzanma.
Polimer zəncirvari reaksiyasının təhlili üçün xüsusi cihazdan - gücləndiricidən istifadə olunur. Müasir avadanlıq diaqnostika zamanı səhvləri aradan qaldırmaq üçün boruların qızdırılması və soyudulması üçün lazımi proqramı qurmağa imkan verir.
Diaqnostika harada istifadə olunur?
Polimer zəncirvari reaksiya üsulu tibbin müxtəlif sahələrində istifadə olunur:
- kriminalistlərləsaç, tüpürcək və ya qan kimi genetik materialı müəyyən edir;
- PCR qan testi, məsələn, müəyyən bir dərmana fərdi genetik xas reaksiyanı aşkar etmək üçün genotipləşdirməyə kömək edir;
- insanlar arasında ailə bağlarının mövcudluğunu müəyyən etmək üçün bu üsuldan istifadə etməklə;
- Müxtəlif yoluxucu xəstəliklərin müəyyən edilməsi üçün tibbi diaqnostikada ən populyar PCR üsulu olmuşdur.
PCR hansı infeksiyaları aşkar edir?
Beləliklə, tibb PCR analizindən çoxdan və uğurla istifadə etmişdir. Bu nədir, biz artıq bilirik. Və onunla hansı patogenləri aşkar etmək olar? Aşağıdakı yoluxucu xəstəliklər PCR üsulu ilə diaqnoz edilir:
- hepatit A, B, C;
- ureaplazmoz;
- kandidoz;
- xlamidiya;
- mikoplazmoz;
- qardnerellyoz;
- infeksion mononükleoz;
- trichomoniasis;
- papillomavirus infeksiyası;
- vərəm;
- herpes infeksiyası tip 1 və 2;
- helikobakterioz;
- sitomeqalovirus;
- difteriya;
- salmonellyoz;
- HİV infeksiyası.
Həmçinin, xərçəngin diaqnostikasında PCR üsullarından istifadə edilir.
Metodun üstünlükləri
PZR diaqnostikasının bir sıra üstünlükləri var:
- Yüksək həssaslıq. Mikroorqanizm DNT-nin yalnız bir neçə molekulunun mövcudluğunda belə, PCR analizi infeksiyanın mövcudluğunu müəyyən edir. Metod xroniki və gizli şəkildə baş verən xəstəliklərə kömək edəcəkdir. Tez-tez belə hallarda mikroorqanizmbaşqa cür becərilə bilməz.
- Tüpürcək, qan, genital sekresiya, saç, epitel hüceyrələri kimi hər hansı material tədqiqat üçün uyğundur. Ən çox görülən PCR üçün qan və sidik-cinsiyyət yaxmasının analizidir.
- Uzun müddətli məhsul tələb olunmur. Avtomatlaşdırılmış diaqnostika prosesi tədqiqatın nəticələrini 4-5 saatdan sonra əldə etməyə imkan verir.
- Metod demək olar ki, 100% etibarlıdır. Yalnız təcrid olunmuş yalan mənfi nəticələrin halları qeydə alınıb.
- Bir material nümunəsindən bir neçə növ patogenləri müəyyən etmək imkanı. Bu, yalnız xəstəliyin diaqnozu prosesini sürətləndirmir, həm də maddi xərcləri əhəmiyyətli dərəcədə azaldır. Tez-tez həkim hərtərəfli PCR analizini təyin edir. Altı patogenin müəyyən edilməsindən ibarət olan müayinənin qiyməti təxminən 1500 rubl təşkil edir.
Təhlizə hazırlaşmaq üçün tövsiyələr
PZR tədqiqatı zamanı nəticələrin etibarlı olması üçün siz diaqnoz üçün ilkin hazırlıq üçün tövsiyələrə əməl edərək testdən keçməlisiniz:
- Tüpürcəyi bağışlamazdan əvvəl nümunə götürməmişdən 4 saat əvvəl yemək yeməkdən və dərman qəbul etməkdən çəkinməlisiniz. Prosedurdan dərhal əvvəl ağzınızı qaynadılmış su ilə yaxalayın.
- Yanağın daxili səthindən nümunə götürərkən də yuxarıdakı qaydalara əməl edilməlidir. Yuyulduqdan sonra vəzinin ifrazını vurğulamaq üçün yüngül dəri masajı etmək tövsiyə olunur.
- Sidik adətən evdə toplanır. Bunu etmək üçün hərtərəfli tualet aparmaq lazımdırcinsiyyət orqanları. Steril bir plastik qabda 50-60 ml sidik toplayın. Materialın təmizliyini təmin etmək üçün qadınlara vajinaya tampon daxil etmək, kişilərə isə dəri qatını mümkün qədər geri çəkmək tövsiyə olunur. Menstruasiya zamanı ianə verməyin.
- Sperma bağışlamaq üçün nümunə götürməzdən əvvəl 3 gün cinsi əlaqədən çəkinməlisiniz. Həkimlər həmçinin saunaya baş çəkməməyi və isti vanna qəbul etməyi, spirt və ədviyyatlı yeməkləri qəbul etməyi məsləhət görürlər. Testdən 3 saat əvvəl sidiyə çıxmaqdan çəkinməlisiniz.
- Sidik-cinsiyyət orqanlarından yaxma götürmək üçün, məsələn, xlamidiya üçün PCR testi aparılarsa, həm qadınlara, həm də kişilərə 3 gün cinsi istirahət etmək tövsiyə olunur. Analizdən 2 həftə əvvəl antibakterial preparatlar qəbul edilməməlidir. Bir həftə ərzində intim gellərdən, məlhəmlərdən, vaginal süpozituarlardan, duşdan istifadə etməyi dayandırmalısınız. Müayinədən 3 saat əvvəl sidiyə çıxmaqdan çəkinməlisiniz. Menstruasiya zamanı nümunə götürülmür, qan axıdılması dayandırıldıqdan cəmi 3 gün sonra sidik-cinsiyyət yaxması götürə bilərsiniz.
hamiləlik zamanı PCR
Uşağın gözləndiyi dövrdə cinsi yolla keçən bir çox infeksiyalar dölün normal inkişafı üçün son dərəcə təhlükəlidir. CYBH intrauterin inkişafın ləngiməsinə, aşağı və ya vaxtından əvvəl doğuşa, uşağın anadangəlmə qüsurlarına səbəb ola bilər. Buna görə də erkən hamiləlikdə PCR müayinəsindən keçmək son dərəcə vacibdir. Qeydiyyat zamanı analizdən keçmək lazımdır - 12 həftəyə qədər.
Material uşaqlıq boynu kanalından xüsusi fırça ilə götürülür. Prosedura ağrısızdır və körpə üçün təhlükə yaratmır. Adətən hamiləlik dövründə PCR üsulu ilə xlamidiya, həmçinin ureaplazmoz, mikoplazmoz, sitomeqalovirus, herpes, papillomavirus üçün analiz aparılır. Belə müayinələr kompleksi PCR-6 adlanır.
HİV diaqnozu üçün PCR
Polimeraza zəncirvari reaksiya metodunun orqanizmdəki dəyişikliklərə və diaqnozun şərtlərinə çox həssas olması səbəbindən nəticəyə bir çox amillər təsir edə bilər. Buna görə də, HİV infeksiyası üçün PCR analizi etibarlı bir üsul deyil, onun effektivliyi 96-98% -dir. Qalan 2-4% hallarda test yanlış müsbət nəticələr verir.
Lakin bəzi hallarda İİV PCR diaqnostikası əvəzolunmazdır. Adətən ELISA-nın yanlış mənfi nəticəsi olan insanlara verilir. Bu cür göstəricilər, bir insanın hələ də virusa qarşı antikorları inkişaf etdirmədiyini göstərir və onların sayının dəfələrlə artması olmadan aşkar edilə bilməz. Bu, PCR qan testi keçirməklə əldə edilə bilən şeydir.
Bu diaqnostika HİV-müsbət anadan doğulan həyatının birinci ilində olan uşaqlar üçün də lazımdır. Metod uşağın statusunu etibarlı şəkildə müəyyən etməyin yeganə yoludur.
Hepatitin diaqnozu üçün PCR
Polimeraza zəncirvari reaksiya metodu hepatit A, B, C virusunun DNT-sini infeksiyaya qarşı anticisimlərin əmələ gəlməsindən və ya xəstəliyin simptomlarının başlamasından çox əvvəl aşkarlamağa imkan verir. Hepatit C üçün PCR analizi xüsusilə təsirlidir, çünki 85% hallarda bu xəstəlik asemptomatikdir və simptomsuz keçir.vaxtında müalicə xroniki mərhələyə keçir.
Patogenin vaxtında aşkarlanması ağırlaşmalardan və uzunmüddətli müalicədən qaçmağa kömək edəcək.
Hərtərəfli PCR müayinəsi
Kompleks PCR analizi: bu nədir? Bu, eyni vaxtda bir neçə növ infeksiyanın təyinini özündə cəmləşdirən polimer zəncirvari reaksiya metodundan istifadə edən bir müayinədir: mikoplazma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, sitomeqalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes 1 və 2 tip gonomallhevirus, pa. Belə diaqnostikanın qiyməti 2000 ilə 3500 rubl arasında dəyişir. klinikadan, istifadə olunan materiallardan və avadanlıqdan, həmçinin analizin növündən asılı olaraq: keyfiyyət və ya kəmiyyət. Sizin vəziyyətinizdə nə lazımdır - həkim qərar verəcək. Bəzi hallarda patogenin varlığını müəyyən etmək kifayətdir, digərlərində, məsələn, HİV infeksiyası ilə kəmiyyət titri mühüm rol oynayır. Yuxarıda göstərilən bütün patogenlərə diaqnoz qoyulduqda, müayinə "PCR-12 analizi" adlanır.
Analiz nəticələrinin transkripti
PZR analizinin deşifrə edilməsi çətin deyil. Göstəricinin cəmi 2 şkalası var - "müsbət nəticə" və "mənfi nəticə". Patogen aşkar edildikdə, həkimlər xəstəliyin varlığını 99% əminliklə təsdiqləyə və xəstəni müalicə etməyə başlaya bilərlər. İnfeksiyanın müəyyən edilməsi üçün kəmiyyət üsulu ilə müvafiq sütun aşkar edilmiş bakteriyaların ədədi göstəricisini göstərəcəkdir. Yalnız həkim xəstəliyin dərəcəsini müəyyən edə və lazımi müalicəni təyin edə bilər.
Bəzi hallarda, məsələn, mənfi nəticə ilə İİV-ə yoluxma PZR ilə müəyyən edilərkən, əldə edilmiş göstəriciləri təsdiqləmək üçün əlavə müayinələr aparmaq zərurəti yaranır.
Sınaqdan harada keçmək lazımdır?
PZR testini harada keçirməli: dövlət klinikasında yoxsa özəl laboratoriyada? Təəssüf ki, bələdiyyə tibb müəssisələrində avadanlıq və üsullar çox vaxt köhnəlib. Ona görə də müasir avadanlıqlara və yüksək ixtisaslı kadrlara malik özəl laboratoriyalara üstünlük vermək daha yaxşıdır. Bundan əlavə, özəl klinikada nəticəni daha tez əldə edəcəksiniz.
Moskvada bir çox özəl laboratoriyalar müxtəlif infeksiyalar üçün PCR analizini təklif edirlər. Məsələn, Vita, Kompleks Klinika, Xoşbəxt Ailə, Uro-Pro, PCR kimi klinikalarda analizlər aparılır. İmtahanın qiyməti 200 rubldan başlayır. bir patogeni müəyyən etmək üçün.
Belə nəticəyə gəlmək olar ki, yoluxucu xəstəliklərin PCR ilə diaqnozu əksər hallarda infeksiyanın ilkin mərhələsində orqanizmdə patogenin aşkarlanmasının sürətli və etibarlı üsuludur. Ancaq yenə də müəyyən hallarda digər diaqnostik üsulları seçməyə dəyər. Yalnız bir mütəxəssis belə bir araşdırmaya ehtiyacı müəyyən edə bilər. PCR analizinin deşifrə edilməsi də peşəkar yanaşma tələb edir. Həkiminizin tövsiyələrinə əməl edin və ehtiyacınız olmayan testlərdən keçməyin.
